From the Guidelines
Redüksiyon deneyi için elisa okuyucu ile bakteri, bakteri+faj, bakteri+antibiyotik ve bakteri+faj+antibiyotik deneyi ayarlarını planlarken, 96-çukur lu plakayı her bir koşulun birden fazla replikasıyla hazırlamanızı öneririm. İlk olarak, uygun medyada logaritamik büyüme evresindeki bakteri kültürlerini (örn. E. coli) hazırlayın. Faj bileşeni için, çeşitli enfeksiyon oranları (1:1:10,1:100) ile karakterize edilmiş bir bakteriyofaj kullanın. Bakteri suşuna karşı etkili bir antibiyotik seçin ve minimum inhibe konsantrasyonu (MIC) seviyelerinde kullanın, böylece tam öldürme yerine azaltma etkilerini gözlemleyebilirsiniz. Uygun kontrolleri dahil edin: yalnızca medya içeren çukurlar, yalnızca faj içeren çukurlar ve yalnızca antibiyotik içeren çukurlar. Plakayı optimal sıcaklıkta (tipik olarak 37°C) inkübe edin ve ELISA okuyucu ile 600nm'de optik yoğunluğu düzenli aralıklarla (0,2,4,8,12,24 saat) ölçün. Azaltma deneyi için, metabolik olarak aktif hücreler tarafından indirgenen bir tetrazolium tuzu gibi MTT veya XTT kullanabilirsiniz, uygun dalga boyunda (tipik olarak 450-490nm) ölçüm yapabilirsiniz. Bu deneysel tasarım, fajlar ve antibiyotiklerin bireysel ve sinerjistik olarak bakteri büyümesini ve metabolizmasını nasıl etkilediğini nicel olarak değerlendirmenize olanak tanır, böylece her iki antimikrobiyal ajan birleştirildiğinde gelişmiş bakteri azaltma ortaya çıkabilir 1.
Ayrıca, bakteri büyümesi ve faj-antibiyotik etkileşimlerini değerlendirmek için farklı yöntemler kullanılabilir, örneğin:
- İzotermal mikrokalorimetri yöntemi
- Methylene blue boyası indirgeme yöntemi
- Bakteri lag fazının uzunluğunu ölçen yöntemler
Bu yöntemler, bakteri büyümesi ve metabolizması üzerindeki faj ve antibiyotik etkilerini daha iyi anlamak için kullanılabilir.
From the Research
Deney Ayarları
Redüksiyon deneyi için ELISA okuyucu ile aşağıdaki deney ayarları planlanabilir:
- Bakteri
- Bakteri + faj
- Bakteri + antibiyotik
- Bakteri + faj + antibiyotik
Deneylerin Amacı
Bu deneylerin amacı, farklı koşullar altında bakteri büyümesindeki değişimleri incelemektir.
- Bakteri deneyi, bakteri büyümesinin temel düzeyini belirlemek için kullanılır 2, 3.
- Bakteri + faj deneyi, fajların bakteri büyümesindeki etkisini incelemek için kullanılır 4, 5.
- Bakteri + antibiyotik deneyi, antibiyotiklerin bakteri büyümesindeki etkisini incelemek için kullanılır 6, 4.
- Bakteri + faj + antibiyotik deneyi, faj ve antibiyotiklerin birlikte bakteri büyümesindeki etkisini incelemek için kullanılır 6, 4.
ELISA Okuyucu Kullanımı
ELISA okuyucu, deney sonuçlarını ölçmek için kullanılır.