From the Guidelines
Endotoksin gidermek ve faj deneyleri için, en recent ve yüksek kaliteli çalışmaya göre 1, bir kombinasyon của fiziksel ve kimyasal yöntemler kullanılması önerilir.
- Endotoksin giderme için, limulus amebocyte lysate (LAL) assayleri başarılı dekontaminasyonu doğrulamak için kullanılmalıdır.
- 0.22 μm filtreden geçirme ile başlayarak, ardından polymyxin B sütunları veya iyon değişim kromatografisi ile tedavi edilmelidir.
- Özellikle duyarlı uygulamalar için, endotoksin-spesifik afiniti reçineleri kullanılması düşünülebilir, bu reçineler <0.1 EU/mL seviyelerine düşürebilir.
- Faj deneyleri sırasında, bakteriyel konak kültürlerinin logaritamik büyüme evresinde (tipik olarak OD600 0.3-0.5) enfeksiyon öncesi olması sağlanmalıdır.
- Enfeksiyon multiplicity (MOI) 0.1-1 arasında olmalıdır, optimal faj propagasyonu için ve spesifik faj-konak sistemi için uygun sıcaklıkta (çoğunlukla 37°C için E. coli fajları) inkübe edilmelidir.
- Endotoksin giderme, bakteriyel lipopolisakkaridlerin hücre kültürleri veya test hayvanlarında inflamasyon phảnlarını tetikleyerek, faj tedavisinin gerçek etkilerini maskeleyebilecekleri için önemlidir.
- Ayrıca, fajlarla çalışırken, güvenilir ve tekrar edilebilir sonuçlar sağlamak için proper kontroller gibi enfekte edilmemiş bakteriyel kültürler ve sterilite kontrolleri luôn dahil edilmelidir.
- Faj susceptibility testing için, çeşitli yöntemler mevcuttur, ancak en yaygın kullanılanlar plaque-based ve liquid-culture-based yöntemlerdir 1.
- Plaque-based yöntemler, faj titresi, lizis profili ve konak aralığını değerlendirmek için kullanılır, ancak laboratuvar yoğun ve zaman alıcı olabilir.
- Liquid-culture-based yöntemler, faj aktivitesini gerçek zamanlı olarak değerlendirmek için kullanılır ve daha hızlı ve daha az laboratuvar yoğun olabilir, ancak kontaminasyonları tespit etmek zor olabilir.
From the Research
Endotoksin Giderme Yöntemleri
- Endotoksin giderme yöntemleri arasında Polymyxin B-immobilized fiber (PMX-F) sütunları kullanılmaktadır 2, 3, 4.
- PMX-F sütunları, endotoksinleri adsorbe ederek kan dolaşımından entferirler 2, 3, 4.
- Bu yöntemin hiệu quảliği çeşitli çalışmalarla gösterilmiştir 2, 3, 4.
Faj Deneyleri
- Faj preparatlarından endotoksin giderme yöntemleri arasında CsCl yoğunluk santrifüjü, Endotrap HD sütun arıtma ve CIM monolitik anyon değişim kromatografisi bulunmaktadır 5.
- Bu yöntemlerin hiệu quảliği farklı faj preparatları üzerinde test edilmiştir 5.