From the Guidelines
Pseudomonas aeruginosa ile çalışırken, öncelikle bu bakteriyi LB besiyerinde 37°C'de çalkalama ile logaritamik fazda yetiştirin (tipik olarak 12-16 saat). A549 hücreleri için, bunları DMEM içinde 10% FBS ve 1% antibiyotik ile 37°C'de 5% CO2 ile yetiştirin. ELISA yaparken, A549 hücrelerinizi uygun plaklara hazırlayın, ardından bunları P. aeruginosa veya ürünlerine göre deneysel tasarınıza uygun şekilde maruz bırakın. İnkübasyon sonrası, hücreleri yıkayın ve standart ELISA protokolünü takip edin: plakları yakalama antikoru ile kaplayın, BSA veya serum ile bloke edin, örnekleri ve standartları ekleyin, tespit antikoru uygulayın, enzim substratı ekleyin ve uygun dalga boyunda bir ELISA okuyucu kullanarak absorbsiyonu ölçün. Kontaminasyonu önlemek için steril teknik kullanın ve untreated hücreler ve reaktif blankları gibi uygun kontrolleri dahil edin 1. Bu yaklaşım, A549 hücrelerinin P. aeruginosa暴露una verdiği yanıt olarak üretilen spesifik proteinleri veya sitokinleri nicelendirmenize olanak tanır.
P. aeruginosa Kültür İşlemleri
- P. aeruginosa'yı LB brothunda 37°C'de çalkalama ile yetiştirin.
- Hücreleri logaritamik fazda yetiştirin (tipik olarak 12-16 saat).
A549 Hücre İşlemleri
- A549 hücrelerini DMEM içinde 10% FBS ve 1% antibiyotik ile 37°C'de 5% CO2 ile yetiştirin.
- Hücreleri uygun plaklara hazırlayın.
ELISA İşlemleri
- A549 hücrelerini P. aeruginosa veya ürünlerine göre deneysel tasarınıza uygun şekilde maruz bırakın.
- İnkübasyon sonrası, hücreleri yıkayın ve standart ELISA protokolünü takip edin.
- Plakları yakalama antikoru ile kaplayın, BSA veya serum ile bloke edin, örnekleri ve standartları ekleyin, tespit antikoru uygulayın, enzim substratı ekleyin ve uygun dalga boyunda bir ELISA okuyucu kullanarak absorbsiyonu ölçün 1.
From the Research
Faj Pseudomonas Aeruginosa ve A549 Hücreleri ile Çalışma
- Pseudomonas aeruginosa, özellikle bağışıklığı zayıf hastalarda önemli bir oportunistik patojendir 2.
- A549 hücreleri, akciğer kanserinden elde edilen bir insan akciğer epitelyal hücre hattıdır ve P. aeruginosa ile çalışmak için kullanılabilir 3.
- A549 hücrelerinin 3D agregatlar olarak yetiştirilmesi, P. aeruginosa ile etkileşimlerini incelemek için daha fizyolojik bir model olabilir 3.
ELISA Okuyucu ile Çalışma
- ELISA okuyucu, P. aeruginosa ile enfekte A549 hücrelerinden salınan sitokinleri ölçmek için kullanılabilir 4.
- İnterleukin-8 (IL-8) salınımı, P. aeruginosa enfeksiyonuna karşı hücrelerin yanıtını ölçmek için kullanılabilir 4.
- Farklı P. aeruginosa suşlarının A549 hücreleri üzerindeki etkileri, ELISA okuyucu ile ölçülebilir 4.
P. Aeruginosa İnfeksiyonu Yönetimi
- P. aeruginosa enfeksiyonlarının tedavisi, sınırlı antibiyotik seçenekleri ve ortaya çıkan direnç nedeniyle zorlu olabilir 5, 6.
- Antibiyotik kombinasyonları, P. aeruginosa enfeksiyonlarının tedavisi için kullanılabilir 5, 6.
- Yeni antibiyotiklerin geliştirilmesi ve antimikrobiyal stewardship, P. aeruginosa direncinin önlenmesi için önemlidir 5, 6.