What are the standard ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) procedures when working with Pseudomonas aeruginosa in A549 cells and ELISA readers?

Medical Advisory BoardAll articles are reviewed for accuracy by our Medical Advisory Board
Educational purpose only • Exercise caution as content is pending human review
Article Review Status
Submitted
Under Review
Approved

Last updated: May 14, 2025 • View editorial policy

Personalize

Help us tailor your experience

Which best describes you? Your choice helps us use language that's most understandable for you.

From the Guidelines

Standart ELISA prosedürleri, Pseudomonas aeruginosa'nın LB besiyerinde yetiştirilmesini ve A549 hücrelerinin uygun medyada kültürleştirilmesini, ardından örneklerin hazırlanmasını ve ELISA levhasının kaplanmasıyla başlar. Bu işlemler sırasında, örneklerin hazırlanması için P. aeruginosa'nın LB brothunda yetiştirilmesi ve süpernatant veya lizatın toplanması, A549 hücrelerinin ise uygun medyada kültürleştirilmesi ve deneysel tasarıma göre işlenmesi gerekir. ELISA levhasının kaplanması, kapanın antikorunun (genellikle 1-10 μg/ml) kaplama tamponunda levha deliklerine uygulanması ve 4°C'de gece boyunca inkübe edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, non-spesifik bağlanma siteleri 1-5% BSA veya yağsız süt ile 1-2 saat oda sıcaklığında bloke edilir. Örnekler ve standartlar deliklere eklenir ve 1-2 saat inkübe edilir. Levha, yıkama tamponu (PBS ile 0.05% Tween-20) ile 3-5 kez yıkanır, ardından tespit antikoru eklenir ve 1-2 saat inkübe edilir. Tekrar yıkandıktan sonra, enzime konjuge ikincil antikor eklenir ve 1 saat inkübe edilir. Son bir yıkamadan sonra, substrat çözeltisi (TMB için HRP veya pNPP için AP) eklenir ve renk gelişene kadar (genellikle 15-30 dakika) inkübe edilir. Reaksiyon, durdurma çözeltisi (TMB için 2N H₂SO₄) ile durdurulur ve absorbans, ELISA okuyucuda uygun dalga boyunda (TMB için 450nm) okunur 1. Bu prosedür, P. aeruginosa ve A549 hücre örneklerinizdeki spesifik antijenlerin veya antikorların kantitatif olarak tespit edilmesini sağlar. Örneğin, P. aeruginosa'nın tanımlanması için sputum, hipofarinks veya endolaringeal süksiyonlar veya derin boğaz kültürü gibi yöntemler kullanılabilir 1. Ayrıca, P. aeruginosa'nın büyümesi için 5% koyun kan agarı veya çikolata agarı gibi standart laboratuvar medyası kullanılabilir 1. Seçici medyalar, seperti cetrimide agar, P. aeruginosa'nın diğer bakteri türlerinden izolasyonunu kolaylaştırır 1. Levhalar, 35°C'de 5% CO2 atmosferinde 24 saat inkübe edilir ve P. aeruginosa kolayca karakteristik koloni morfolojisi ve standart mikrobiyolojik yöntemlerle tanımlanabilir 1.

From the Research

Standart ELISA Prosedürleri

Standart ELISA prosedürleri, çeşitli çalışmalarda tanımlanmıştır 2, 3. Bu prosedürler genellikle aşağıdaki adımları içerir:

  • Örnek hazırlama: Örnekler, ELISA analizine uygun bir forma getirilir.
  • Mikrotiter plakalarının hazırlanması: Mikrotiter plakaları, antijen veya antikor ile kaplanır.
  • Örneklerin eklenmesi: Hazırlanan örnekler, mikrotiter plakalarına eklenir.
  • Inkübasyon: Örnekler, belirli bir süre boyunca inkübe edilir.
  • Deteksiyon: ELISA đọcucu kullanılarak, örneklerin absorbans değerleri ölçülür.

ELISA Uygulamaları

ELISA, çeşitli uygulamalarda kullanılır 2, 3. Örneğin:

  • Pseudomonas aeruginosa exotoxin A'nın tespit edilmesi 2
  • Pseudomonas aeruginosa alkaline proteinaz, elastaz ve exotoxin A'nın quantify edilmesi 3
  • A549 hücrelerinin Pseudomonas aeruginosa ile enfeksiyonuna yanıtının incelenmesi 4

A549 Hücreleri ile Çalışma

A549 hücreleri, çeşitli çalışmalarda kullanılmıştır 5, 6, 4. Bu hücreler, insan akciğer epitelyal hücrelerini temsil eder ve Pseudomonas aeruginosa ile enfeksiyon çalışmaları için uygun bir modeldir.

  • A549 hücrelerinin hazırlanması: Hücreler, uygun bir ortamda yetiştirilir ve deneyler için hazırlanır.
  • Pseudomonas aeruginosa ile enfeksiyon: Hücreler, Pseudomonas aeruginosa ile enfekte edilir ve réponse incelenir.

References

1
Guideline

Guideline Directed Topic Overview

Dr.Oracle Medical Advisory Board & Editors, 2025

Related Questions

What is the diagnosis (Dx) and differential diagnosis (DDx) for a 72-year-old female with a history of coronary artery disease (CAD), hypertension (HTN), hyperlipidemia (HLP), and Hashimoto's hypothyroidism, presenting with numbness in her distal lower extremities, fatigue, leukocytosis, anemia, thrombocytopenia, and splenomegaly?
Does vitamin B12 (cobalamin) deficiency impact hemoglobin levels?
What is the diagnosis for a 44-year-old male with diabetes, hypertension, hyperlipidemia, and GERD presenting with a worsening moist nonproductive cough and intermittent wheezing at night, despite taking Mucinex (guaiifenesin)?
What substances promote the formation of kidney stones in renal lithiasis (Kidney Stone Disease)?
What is the most likely diagnosis for a patient presenting with asymptomatic lymphocytosis (lymphocyte count elevation) and painless lymphadenopathy (enlarged lymph nodes)?
What are the implications of liver cirrhosis without hepatomegaly (enlargement of the liver)?

Professional Medical Disclaimer

This information is intended for healthcare professionals. Any medical decision-making should rely on clinical judgment and independently verified information. The content provided herein does not replace professional discretion and should be considered supplementary to established clinical guidelines. Healthcare providers should verify all information against primary literature and current practice standards before application in patient care. Dr.Oracle assumes no liability for clinical decisions based on this content.

Have a follow-up question?

Our Medical A.I. is used by practicing medical doctors at top research institutions around the world. Ask any follow up question and get world-class guideline-backed answers instantly.

Ask Question