Medición de la Agregación y Disfunción Plaquetaria
La medición de la agregación y disfunción plaquetaria se realiza principalmente mediante pruebas escalonadas que incluyen como primera línea la agregometría por transmisión de luz (LTA), pruebas de liberación de gránulos y citometría de flujo, seguidas de pruebas más especializadas según sea necesario. 1
Pruebas de Primera Línea
Agregometría por Transmisión de Luz (LTA)
- Considerada el estándar de oro para evaluar la función plaquetaria
- Requiere aproximadamente 21-28 mL de sangre
- Evalúa respuestas a diversos agonistas:
- Epinefrina
- ADP
- Colágeno
- Ácido araquidónico
- Ristocetina
Pruebas de Liberación de Gránulos
- Gránulos alfa: Medición de proteínas granulares en sobrenadantes mediante ELISA o citometría de flujo
- Gránulos densos: Evaluación de liberación de ATP/ADP mediante lumiaggregometría, luminometría o HPLC
Citometría de Flujo
- Evaluación de plaquetas en reposo usando anticuerpos contra:
- GPIIb/IIIa (CD41)
- GPIIIa (CD61)
- GPIb (CD42b)
- GPIb/IX (CD42a)
- Evaluación de plaquetas activadas usando anticuerpos contra epítopos de activación de GPIIb/IIIa (PAC-1)
Pruebas de Segunda Línea
Cuando las pruebas de primera línea no son diagnósticas, se procede con:
LTA Ampliada
- Panel expandido de agonistas:
- α-trombina
- TRAP-6
- U46619
- CRP
- Convulxina
- Péptido activador PAR-4
- PMA
- A23287
Citometría de Flujo Ampliada
- Evaluación de glicoproteínas adicionales:
- GPIa/IIa (CD31 y CD49b)
- GPIV (CD36)
- GPVI
- Evaluación de actividad procoagulante plaquetaria (unión de anexina V)
Otras Pruebas
- Retracción del coágulo: Incubación de sangre completa no anticoagulada durante 60 minutos a 37°C
- Medición de TxB2 sérico: Mediante ELISA o RIA para detectar defectos en la liberación o metabolismo del ácido araquidónico
- Microscopía electrónica de transmisión (TEM): Para contar gránulos α o densos y/o identificar alteraciones estructurales
Pruebas de Tercera Línea
Para casos no diagnosticados pero con fuerte sospecha de trastorno plaquetario:
- Estudios bioquímicos
- Ensayos de unión a receptores
- Estudios genéticos moleculares
- Requieren aproximadamente 40-50 mL de sangre
- Disponibles solo en centros especializados
Consideraciones Técnicas Importantes
- Los laboratorios deben establecer intervalos de referencia internos 1
- La concentración plaquetaria es un parámetro crítico para la evaluación 2
- Los estudios repetidos de función plaquetaria deben separarse por al menos 1 mes 1
- La PFA-100 y el tiempo de sangría no se recomiendan por insuficiente especificidad/sensibilidad 1
Nuevos Enfoques para Casos Especiales
Para Pacientes con Trombocitopenia
- Se han desarrollado métodos de citometría de flujo para evaluar la agregación plaquetaria independientemente del recuento plaquetario del paciente 3
- Estrategias específicas para muestras de plasma rico en plaquetas con recuentos bajos (L-PRP) 4:
- Selección adaptada de agonistas según la gravedad de la trombocitopenia
- Interpretación de la agregación máxima utilizando intervalos de confianza del 95%
Pitfalls y Precauciones
- La respuesta defectuosa a la epinefrina es frecuente en el cribado rutinario y debe considerarse un criterio para estudios adicionales solo cuando hay otras anomalías o fuerte sospecha clínica 1
- Factores que pueden afectar los resultados:
- Tipo y concentración del anticoagulante
- Técnica de centrifugación
- Tiempo de almacenamiento de la muestra
- Temperatura
- Medicamentos que afectan la función plaquetaria (como clopidogrel) 5
La evaluación sistemática y escalonada de la función plaquetaria permite diagnosticar aproximadamente el 40% de los trastornos plaquetarios con las pruebas de primera línea, un 7% adicional con las pruebas de segunda línea, y generar sospecha diagnóstica para otro 40% que requerirá pruebas adicionales para su confirmación 1.