How is CD4 count accurately determined?

Cálculo de CD4 según Cuadro Hemático

El recuento absoluto de células CD4+ se determina mediante la multiplicación de tres valores: el conteo total de glóbulos blancos (WBC), el porcentaje de linfocitos en el diferencial, y el porcentaje de linfocitos que son CD4+ determinado por citometría de flujo.

Métodos para determinar el recuento de CD4

Tecnología de plataforma dual (método tradicional)

Este método utiliza dos instrumentos diferentes:

1. Analizador hematológico: Proporciona:

   • Recuento total de glóbulos blancos (WBC)
   • Porcentaje de linfocitos (diferencial)

2. Citómetro de flujo: Determina:

   • Porcentaje de linfocitos que son CD4+

3. Cálculo final:

   CD4 absoluto (células/mm³) = WBC × % linfocitos × % CD4+ entre linfocitos

Tecnología de plataforma única (método preferido)

Este método más reciente permite determinar tanto valores absolutos como porcentuales de subconjuntos de linfocitos usando un solo tubo 1.

Ventajas:

• Menor variabilidad interlaboratorio
• Mayor precisión
• Resultados más consistentes

Procedimiento recomendado

1. Obtención de muestra:

   • Sangre total por venopunción
   • Procesamiento dentro de las 6 horas posteriores a la extracción 1

2. Análisis por citometría de flujo:

   • Preferentemente usar estrategia de identificación de linfocitos mediante fluorescencia CD45 y características de dispersión lateral 1
   • Utilizar citometría de tres o cuatro colores para mayor precisión 1

3. Control de calidad:

   • Optimalmente, al menos 95% de los linfocitos deben estar dentro de la puerta de linfocitos (mínimo 90%) 1
   • Optimalmente, al menos 90% de pureza linfocitaria debe observarse dentro de la puerta (mínimo 85%) 1
   • La suma de %CD3+CD4+ y %CD3+CD8+ debe igualar el total de %CD3+ con una variación máxima de ±5% (mínimo ±10%) 1

4. Reporte de resultados:

   • Reportar datos como porcentaje del total de linfocitos
   • Corregir según la pureza linfocitaria de la puerta 1
   • Reportar valores absolutos cuando se ha realizado un conteo completo de células sanguíneas (CBC) de sangre extraída al mismo tiempo 1

Fuentes de variabilidad

La variabilidad en el recuento de CD4+ proviene de tres componentes principales 1:

1. Variabilidad en el recuento de WBC:

   • Con contador leucocitario automatizado: 2.2%-7.7%
   • Con hemocitómetro: 9.3%-17.6%

2. Variabilidad en el diferencial de linfocitos:

   • Conteos automatizados: 1.9%-5.3%
   • Conteos manuales: 12.5%-27%

3. Variabilidad biológica:

   • Diurna: aproximadamente 10%
   • Semanal: aproximadamente 13%

Tecnologías alternativas para entornos con recursos limitados

Para laboratorios en entornos con recursos limitados, existen alternativas más económicas 2, 3:

• Citómetros volumétricos: Como CyFlow Counter con reactivos liofilizados
• Sistemas portátiles: Como Pima CD4
• Métodos de "gating primario de CD4": Utilizan anticuerpos monoclonales CD4 conjugados con diferentes fluorocromos 4
• Método CD45/CD4: Permite recuentos volumétricos absolutos con excelente correlación con métodos estándar 5

Consideraciones importantes

• Los resultados de la citometría de flujo deben procesarse dentro de las 6 horas posteriores a la extracción de sangre para mayor precisión 1
• La tecnología de plataforma única tiene el potencial de proporcionar análisis menos variables que los métodos de plataforma múltiple 1
• La participación en programas de evaluación de desempeño es esencial para garantizar resultados precisos 1
• La capacitación adecuada del personal técnico es fundamental para generar mediciones volumétricas precisas de CD4 2

Precauciones y limitaciones

• Las muestras deben procesarse dentro del tiempo recomendado para evitar degradación celular
• Los controles de calidad internos y externos son esenciales para garantizar la precisión
• Los laboratorios no deben adoptar métodos que produzcan resultados significativamente diferentes de los métodos de plataforma múltiple hasta que estos hayan sido validados 1
• La variabilidad entre laboratorios puede reducirse mediante análisis repetidos, estandarización de protocolos, mejora de tecnología y capacitación del personal 1