Procedimiento de Electroforesis de Hemoglobina
La electroforesis de hemoglobina se realiza principalmente mediante cromatografía líquida de alta resolución de intercambio catiónico (HPLC) y electroforesis capilar, que separan las hemoglobinas según sus diferencias de carga eléctrica. 1
Métodos principales
- La cromatografía líquida de alta resolución de intercambio catiónico (HPLC) es el método de elección para el cribado inicial y diagnóstico de hemoglobinopatías, cuantificando la hemoglobina basándose en las diferencias de carga entre componentes glucosilados y no glucosilados 1
- La electroforesis capilar de zona (CZE) se realiza a diferentes pH (típicamente pH 8.7 y pH 4.7) en capilares de sílice fundida, proporcionando perfiles de elución complementarios que permiten una mejor identificación de variantes 2
- La electroforesis capilar ofrece alta sensibilidad, rapidez, menor trabajo manual y alta selectividad para la separación de variantes de hemoglobina 2
Procedimiento técnico
- Las muestras de glóbulos rojos se lisan en agua y se diluyen en tampón para el análisis 3
- El sistema Capillarys II es el primer sistema de electroforesis capilar totalmente automatizado que permite la cuantificación de HbA2 y HbF y la separación de variantes de Hb 4
- La imprecisión en los tiempos de migración es inferior al 1%, y para la cuantificación de HbA2 es menor al 3.5% y para HbF menor al 7.0% 4
Aplicaciones clínicas
- Se recomienda realizar electroforesis de hemoglobina cuando se observa microcitosis e hipocromía en pacientes de grupos étnicos apropiados para prevenir investigaciones innecesarias 5
- Es útil para el diagnóstico de metahemoglobinemia congénita o adquirida, especialmente cuando hay antecedentes familiares de cianosis 5
- Permite identificar variantes de hemoglobina M (HbM) causadas por mutaciones que afectan los genes de globina α-, β- o γ- 5
Estándares de control de calidad
- Los laboratorios siguen estándares internacionales para la medición de HbA1c con CV intralaboratorio <1.5% e interlaboratorio <2.5%, certificados por el Programa Nacional de Estandarización de Glicohemoglobina (NGSP) 1
- Los resultados deben ser trazables al método de referencia del Ensayo de Control y Complicaciones de la Diabetes (DCCT) y a la Federación Internacional de Química Clínica y Medicina de Laboratorio (IFCC) 1
Limitaciones y consideraciones
- Las variantes de hemoglobina pueden interferir con las mediciones de HbA1c, potencialmente causando resultados falsamente altos o bajos 1
- La electroforesis por sí sola puede no ser suficiente para identificar todas las variantes de hemoglobina, especialmente aquellas electroforéticamente silenciosas 5
- Para el diagnóstico definitivo de variantes de HbM, la secuenciación dirigida de los genes de globina α y β es técnicamente más simple, más ampliamente disponible y más específica 5
- Las condiciones que alteran la vida útil de los glóbulos rojos pueden afectar los resultados independientemente del método de ensayo 1
Avances recientes
- La electroforesis capilar acoplada a espectrometría de masas de alta resolución (CE-HR-MS) permite la identificación de variantes de hemoglobina mediante análisis "top-down", caracterizando las estructuras primarias de las subunidades de Hb 3
- Este método tiene ventajas significativas para complementar o reemplazar parcialmente los métodos convencionales para la identificación de variantes de Hb 3
Interpretación de resultados
- La identificación de variantes de hemoglobina debe conducir a un asesoramiento genético adecuado, especialmente en familias con patrones de herencia específicos 5
- Es importante realizar estudios familiares cuando se identifica una hemoglobinopatía, crucial para el asesoramiento genético y la planificación familiar 5
- Las hemoglobinas M (HbM) y las hemoglobinas inestables generalmente no responden al tratamiento con azul de metileno, lo que debe considerarse en el manejo de la metahemoglobinemia 5