Interpretación de Resultados de FISH
Los resultados de FISH deben interpretarse siempre en el contexto clínico específico del paciente, con especial precaución en resultados limítrofes o borderline, ya que los valores de corte son solo estimaciones del límite superior de patrones anormales en poblaciones normales. 1
Principios Fundamentales de Interpretación
Resultados Limítrofes (Borderline)
Los resultados borderline-positivos y borderline-negativos requieren interpretación con extrema cautela y siempre en contexto de otros hallazgos clínicos y de laboratorio. 1
Por ejemplo, una médula ósea de un paciente recién diagnosticado con leucemia mieloide crónica NO debería mostrar un resultado borderline-positivo con análisis FISH de BCR/ABL1. 1
De manera similar, no se esperaría un resultado positivo de bajo nivel para síndromes de microduplicación comunes, ya que las duplicaciones son bastante grandes y no se espera mosaicismo. 1
Tipos de Muestras No Estándar
Cuando el FISH interfase se realiza en tipos de muestras raras o preparaciones citogenéticas no estándar (como portaobjetos con bandas G desteñidas), el director del laboratorio debe considerar incluir una advertencia sobre las limitaciones de estos materiales en el informe. 1
Un resultado abrumadoramente positivo con un conjunto de sondas de reordenamiento probablemente no necesita calificación en el informe, pero un resultado moderadamente positivo obtenido con una sonda utilizada para detectar deleciones del brazo largo del cromosoma 5 podría requerirlo. 1
Criterios para Reportar Resultados Anormales
Análisis con Número Reducido de Núcleos
A discreción del director del laboratorio, un resultado anormal de FISH interfase puede reportarse incluso cuando el número de núcleos es menor al estándar para la prueba. 1
La prueba puede terminarse prematuramente si cada uno de los dos lectores encuentra tantos núcleos anormales, o más, como se requiere para exceder el valor de corte normal (si se hubiera realizado un análisis completo). 1
Las muestras con números inadecuados de núcleos pueden reportarse como anormales si el número de núcleos anormales entre los núcleos disponibles excede el número que se habría requerido en un estudio completo. 1
Patrones de Señal Inesperados
Anormalidades Adquiridas
El FISH interfase para anormalidades adquiridas puede detectar patrones de señal potencialmente anormales que no fueron anticipados durante el desarrollo y validación de la prueba. 1
Tales patrones de señal deben interpretarse con precaución y considerarse en el contexto de las indicaciones clínicas para la prueba. 1
El FISH en metafase puede ser útil para aclarar estos patrones de señal. 1
Amplificación Génica
Criterios Específicos por Enfermedad
Para pruebas que no utilizan un kit aprobado por la FDA, la presencia/ausencia de amplificación génica debe reportarse en el contexto de un locus control o en el contexto de controles positivos y negativos. 1, 2
No existe actualmente un estándar universal para lo que constituye evidencia FISH de amplificación génica; el objetivo es prevenir que la poliploidía se reporte como amplificación génica. 1
Los umbrales de amplificación son específicos de la enfermedad:
Cuando se detecta amplificación y hay células en división disponibles en la muestra, debe incluirse en el informe una recomendación para análisis cromosómico convencional (para detectar región de tinción homogénea, dobles minutos, etc.). 1, 2
Limitaciones Específicas de la Técnica
Microdeleciones y Microduplicaciones
Cuando se usa FISH interfase para detectar una microdeleción o microduplicación en la que la sonda no se dirige al gen crítico responsable del síndrome, los resultados normales deben acompañarse de una advertencia que indique la limitación de la prueba. 1
Esta advertencia debe incluir información como: "La sonda utilizada, sin embargo, puede dar un resultado normal en casos que se deben a deleciones muy pequeñas, mutaciones puntuales u otras etiologías genéticas." 1
FISH en Metafase vs. Interfase
El análisis FISH en metafase proporciona información solo sobre el locus de la sonda en cuestión y no sustituye el análisis cariotípico completo. 1, 2
El análisis FISH en metafase es adecuado para la detección de microdeleciones, pero la prueba de microduplicación debe basarse, al menos en parte, en el análisis de núcleos en interfase. 1, 2
Las duplicaciones contiguas pueden resultar en señales FISH muy cercanas entre sí, incluso en interfase. 1
Consideraciones de Mosaicismo
Si no se ha desarrollado una base de datos para interpretar mosaicismo para una sonda particular (o conjunto de sondas), debe ejercerse precaución en cualquier conclusión sobre la presencia de mosaicismo. 1
El informe de prueba debe indicar claramente que la sensibilidad de la prueba para detectar mosaicismo es desconocida. 1
Fallas de Hibridación
- En situaciones donde no se conoce el procedimiento de fijación (por ejemplo, una muestra archivada o recibida de una institución externa) y la hibridación falla, debe incluirse una nota en el informe indicando que variables como el tipo de fijador o la edad del bloque de parafina pueden impactar negativamente la eficiencia de hibridación. 1