Cómo se ven las micobacterias en el Gram
La tinción de Gram NO es adecuada para la detección de micobacterias y no debe utilizarse para este propósito. 1
Por qué el Gram no funciona para micobacterias
Las micobacterias tienen propiedades de tinción variables e impredecibles con el método de Gram debido a su pared celular única rica en ácidos micólicos y lípidos:
Las micobacterias de crecimiento rápido (como M. chelonae, M. smegmatis, M. phlei) aparecen como Gram-indefinidas o Gram-variables cuando se usa el procedimiento estándar de Gram 2
Las micobacterias de crecimiento lento (como M. tuberculosis, M. avium, M. intracellulare) son Gram-positivas pero extremadamente difíciles de teñir con el método convencional, frecuentemente no tiñéndose en absoluto 2
Algunas micobacterias (M. leprae, M. lepraemurium) no se tiñen con el procedimiento rutinario de Gram 2
Las micobacterias no tuberculosas, especialmente las de crecimiento rápido, pueden ser más sensibles al procedimiento de decoloración con ácido-alcohol y pueden no teñirse en absoluto con tinciones de fluorocromo o Gram 1
Métodos correctos de tinción
Las tinciones ácido-alcohol resistentes son el estándar de oro para visualizar micobacterias:
Técnica de fluorocromo es el método recomendado para teñir especímenes clínicos en busca de bacilos ácido-alcohol resistentes (BAAR), incluyendo tanto M. tuberculosis como micobacterias no tuberculosas 1
Ziehl-Neelsen o tinción de Kinyoun son alternativas aceptables pero menos sensibles que el método de fluorocromo 1
Auramina-fenol (método de fluorocromo) permite la detección de micobacterias en muestras primarias 1
Advertencia crítica sobre interpretación
Un frotis negativo NO significa necesariamente que las micobacterias no estén presentes en una muestra clínica, especialmente para micobacterias de crecimiento rápido 1
La identificación de micobacterias requiere al menos 10⁴ organismos por ml para ser detectados por tinción de Ziehl-Neelsen convencional 3
No se pueden sacar conclusiones sobre la identidad de las micobacterias basándose únicamente en la apariencia microscópica en muestras primarias 1
Nota técnica especial
Si se debe usar Gram por alguna razón (no recomendado), las micobacterias solo se vuelven consistentemente Gram-positivas cuando se aplica calor durante el primer paso de tinción, pero esto no es un método diagnóstico confiable 2. Incluso con modificaciones de calentamiento, solo algunas micobacterias tomarán la tinción azul de Gram, y los resultados son variables e inconsistentes 4.
En resumen: abandone el Gram para micobacterias y use siempre tinciones ácido-alcohol resistentes (fluorocromo, Ziehl-Neelsen, o Kinyoun). 1