From the Guidelines
Konfokal mikroskopi ile bakteriyofaj incelemesi için, örneklerin floresan boyalar ile boyanması ve yüksek çözünürlüklü görüntüler elde edilmesi önerilir. Bu teknik, bakteriyofajların yapısını, özellikle kapsid (baş) ve kuyruk bileşenlerini olağanüstü netlikte görmeyi sağlar. Konfokal mikroskopi, lazer kullanarak floresan boyaları uyarmak ve bir pinhole apertürü aracılığıyla yayılan ışığı toplamak suretiyle çalışır, bu da odak dışı ışığın ortadan kaldırılmasını ve keskin optik kesitlerin oluşturulmasını sağlar 1. Bu teknik, üç boyutlu rekonstrüksiyonlar oluşturmak için farklı derinliklerde birden fazla optik kesit yakalamayı da sağlar.
- Örnek hazırlama: Bakteriyofajları bir mikroskop slaytına sabitleyin ve nükleik asitlere bağlanan floresan boyalar ile boyayın, seperti SYBR Green veya DAPI.
- Konfokal mikroskopi ayarları: Yüksek büyütme objektifleri (63x veya 100x) ile yağ emme kullanın, lazer gücünü fotobeyazlatmayı en aza indirmek için ayarlayın ve algılayıcı ayarlarını kontrastı artırmak ve arka plan gürültüsünü azaltmak için optimize edin.
- Uygulama: Bu yaklaşım, özellikle faj-konak etkileşimleri ve bakteriyofaj biyolojisi ve potansiyel uygulamaları için kritik olan yapısal detayları anlamak için çok değerli olur.
From the Research
Konfokal Mikroskopi ile Bakteriyofaj İncelenmesi
- Konfokal mikroskopi, yüksek çözünürlüklü floresan mikroskobisi için değerli bir araçtır ve biyolojik araştırma merkezlerinin çoğunda en az bir tane bulunabilir 2.
- Floresan etiketli antikorlar ve ligandlar, spesifik molekülleri lokalize etmek için temel araçlardır ve konfokal mikroskopi bu tür çalışmalar için önemlidir 2.
- Bakteriyofajların incelenmesi genellikle elektron mikroskobisi ile yapılır, ancak konfokal mikroskopi de bu alanda kullanılabilmektedir 3, 4.
- Konfokal mikroskopi, kalın doku örneklerinde yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar ve bu özelliği ile bakteriyofajların ve diğer mikroorganizmaların incelenmesinde faydalı olabilir 5.
- Bakteriyofajların konfokal mikroskopi ile incelenmesi, floresan etiketli prob lar kullanılarak yapılabilir ve bu yöntem, bakteriyofajların hücrelere nasıl bağlandığını ve nasıl yayıldığını incelemeye olanak tanır 4.