Prueba de ELISA: Propósito y Procedimiento
La prueba de ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas) es una técnica inmunológica altamente sensible utilizada para detectar y cuantificar antígenos o anticuerpos en una muestra, con aplicaciones en diagnóstico clínico, investigación y control de calidad.
Tipos de ELISA
Existen cuatro formatos básicos de ELISA, cada uno con propósitos específicos:
ELISA directo: El más simple, requiere un antígeno y un anticuerpo conjugado con enzima específico para ese antígeno. El anticuerpo marcado se une directamente al antígeno fijado en la placa 1.
ELISA indirecto: Utiliza anticuerpos secundarios conjugados con enzimas que se unen a los anticuerpos primarios que están unidos al antígeno fijado en la placa. Es ampliamente utilizado para detectar anticuerpos específicos en suero o saliva 2, 3.
ELISA sándwich: Incluye un antígeno de muestra introducido en una placa pre-recubierta con anticuerpos, seguido de la unión secuencial de anticuerpos de detección y secundarios conjugados con enzimas 4.
ELISA competitivo: Implica una competencia entre el antígeno de la muestra y el antígeno fijado en la placa por el anticuerpo primario 4.
Procedimiento General
El procedimiento básico de ELISA incluye los siguientes pasos:
Fijación del antígeno o anticuerpo: Se adhiere a una superficie sólida, generalmente placas de poliestireno de 96 o 384 pocillos 1.
Bloqueo: Se añade una solución bloqueante para prevenir uniones no específicas.
Adición de la muestra: Se añade la muestra que contiene el analito de interés.
Adición del anticuerpo conjugado con enzima: Directamente o mediante un sistema de anticuerpos primario y secundario.
Adición del sustrato: La enzima cataliza una reacción que produce una señal detectable (color, luz, fluorescencia).
Medición: La señal se mide cualitativa o cuantitativamente mediante inspección visual o utilizando un luminómetro o espectrofotómetro 4.
Aplicaciones Clínicas
La prueba ELISA tiene numerosas aplicaciones en el ámbito médico:
Diagnóstico de enfermedades infecciosas: Detección de anticuerpos contra patógenos específicos o antígenos de los mismos.
- Por ejemplo, en el diagnóstico de infección por Helicobacter pylori mediante la detección de anticuerpos específicos 5.
Diagnóstico de enfermedades autoinmunes: Como en el penfigoide ampolloso, donde los ELISA comerciales pueden detectar anticuerpos contra BP180 y BP230 5.
Detección de candidiasis invasiva: Mediante la detección combinada de antígeno manano (Mn) y anticuerpos anti-manano (A-Mn) 5.
Diagnóstico de rickettsiosis: Aunque con limitaciones debido a posibles reacciones cruzadas con otros patógenos 5.
Detección de infecciones fúngicas: Como en la detección de galactomanano para el diagnóstico de aspergilosis invasiva 5.
Diagnóstico de fiebre Q: Mediante la detección de anticuerpos contra Coxiella burnetii 5.
Análisis de bioaerosoles: Para estudios epidemiológicos y evaluación de riesgos ambientales 5.
Evaluación de candidatos a trasplante renal: Para detectar anticuerpos anti-HLA 5.
Ventajas y Limitaciones
Ventajas:
Alta sensibilidad y especificidad: Comparable a los radioinmunoensayos pero sin los riesgos de la radiactividad 6.
Versatilidad: Puede adaptarse para detectar casi cualquier proteína 4.
Simplicidad: Relativamente fácil de realizar y automatizar 1, 3.
Resultados rápidos: Generalmente disponibles en pocas horas 5.
Limitaciones:
Posibles reacciones cruzadas: Pueden ocurrir entre especies relacionadas, como entre Coxiella, Legionella y Bartonella 5.
Variabilidad entre laboratorios: Los resultados pueden variar según los protocolos y reactivos utilizados 5.
Limitaciones en la interpretación: En algunas enfermedades, como la fiebre Q, los anticuerpos IgM pueden persistir, dificultando la interpretación de resultados recientes 5.
Necesidad de estandarización: Falta de protocolos estandarizados para algunas aplicaciones 5.
Consideraciones Importantes
Optimización del ensayo: Es crucial realizar titulaciones en tablero de ajedrez para optimizar las concentraciones de antígenos y anticuerpos 1, 3.
Control de calidad: Deben incluirse controles positivos y negativos en cada ensayo para validar los resultados.
Interpretación clínica: Los resultados deben interpretarse en el contexto de la historia clínica y otros hallazgos de laboratorio 5.
Seguimiento de enfermedades: En algunas condiciones, los niveles de anticuerpos medidos por ELISA pueden correlacionarse con la actividad de la enfermedad, como en el penfigoide ampolloso 5.