Prueba de ELISA: Propósito e Interpretación
La prueba de ELISA (Ensayo por Inmunoabsorción Ligado a Enzimas) es un método inmunológico altamente sensible utilizado para detectar y cuantificar anticuerpos o antígenos específicos en una muestra, siendo fundamental para el diagnóstico de enfermedades infecciosas, autoinmunes y otros trastornos. 1, 2
Tipos de ELISA
ELISA directo: El más simple, requiere un antígeno y un anticuerpo conjugado con enzima específico para el antígeno. Se utiliza principalmente en investigación de laboratorio 3
ELISA indirecto: Detecta anticuerpos en la muestra del paciente que se unen a antígenos inmovilizados en una superficie, utilizando un anticuerpo secundario conjugado con enzima. Es ampliamente utilizado en diagnóstico clínico 4
ELISA sándwich: Implica un anticuerpo de captura, seguido por la muestra que contiene el antígeno, y finalmente un anticuerpo de detección conjugado con enzima. Ofrece mayor sensibilidad para diagnósticos clínicos 2
ELISA competitivo: Involucra competencia entre el antígeno de la muestra y el antígeno fijado a la placa por unirse al anticuerpo primario 2
Aplicaciones Clínicas
Diagnóstico de enfermedades infecciosas: Detecta anticuerpos contra patógenos específicos o sus antígenos 1
Diagnóstico de enfermedades autoinmunes:
- En hepatitis autoinmune (HAI), el ELISA se utiliza para detectar anticuerpos anti-SLA (antígeno soluble hepático), siendo el único autoanticuerpo específico para HAI 5
- Para otros autoanticuerpos como ANA y SMA, se prefiere la inmunofluorescencia indirecta (IFI), ya que el ELISA puede dar falsos negativos en aproximadamente un tercio de los pacientes 5
Evaluación pre-trasplante: Detecta anticuerpos anti-HLA en candidatos a trasplante renal 1
Detección de infecciones fúngicas: Identifica galactomanano para el diagnóstico de aspergilosis invasiva 1
Diagnóstico de infecciones bacterianas: Como la detección de anticuerpos contra Helicobacter pylori 1
Procedimiento Básico
Fijación del antígeno/anticuerpo: Se adhiere a una superficie sólida (generalmente placa de poliestireno) 6
Bloqueo: Para prevenir uniones no específicas 1
Adición de la muestra: Contiene el anticuerpo o antígeno a detectar 6
Adición del conjugado enzimático: Anticuerpo conjugado con enzima que se une al complejo formado 6
Adición del sustrato: La enzima cataliza una reacción que produce color o señal luminosa 4
Medición: Cuantificación mediante espectrofotometría o luminometría 2
Interpretación de Resultados
Los resultados deben interpretarse en el contexto de la historia clínica y otros hallazgos de laboratorio 1
En hepatitis autoinmune, los títulos de autoanticuerpos en pacientes pediátricos pueden ser biomarcadores útiles que reflejan la actividad de la enfermedad y pueden utilizarse para monitorizar la respuesta al tratamiento 5
Para hepatitis C, una prueba ELISA positiva en un paciente con enfermedad hepática crónica probablemente sea suficiente para diagnosticar la infección por VHC, aunque se sugiere una prueba confirmatoria de PCR para ARN del VHC 5
Limitaciones y Consideraciones
Posibles reacciones cruzadas: Pueden ocurrir entre especies relacionadas, afectando la especificidad 1
Necesidad de estandarización: Los protocolos de ELISA requieren estandarización para asegurar resultados confiables 1
Control de calidad: Es crucial incluir controles positivos y negativos 1
Conformación proteica: La conformación de las proteínas tras la adsorción en la superficie plástica puede impedir la unión del anticuerpo al epítopo, lo que puede superarse mediante un paso de desnaturalización química 7
Falsos negativos en autoinmunidad: Para ANA, el ELISA puede resultar en falsos negativos en aproximadamente un tercio de los pacientes con hepatitis autoinmune 5
Para obtener resultados óptimos, los laboratorios de serología y los médicos deben aumentar su experiencia y comunicarse estrechamente en la interpretación de la serología de enfermedades autoinmunes hepáticas para proporcionar máximos beneficios a los pacientes 5.