How are platelets produced with citrate?

Preparación de Plaquetas con Citrato

El citrato de sodio (0.109 mol/L concentración final) es el anticoagulante más utilizado para la preparación de plaquetas, aunque el citrato-dextrosa ácido (ACD) y el citrato-fosfato-dextrosa (CPD) son alternativas efectivas que previenen mejor la activación plaquetaria. 1

Anticoagulantes Recomendados

Opciones Principales

• Citrato trisódico (0.109 mol/L) es el anticoagulante más comúnmente utilizado según las recomendaciones de la Sociedad Internacional de Trombosis y Hemostasia 1
• ACD (Acid Citrate Dextrose) y CPD (Citrate Phosphate Dextrose), incluyendo ACD-A y CPD-A, son anticoagulantes efectivos para la preparación de plaquetas 1
• ACD-A es el anticoagulante preferido para la recolección de muestras de plaquetas cuando se requiere preservación durante varios días, ya que es eficiente en mantener las plaquetas viables durante el transporte 1
• CTAD (citrato-teofilina-adenosina-dipiridamol) y ACD previenen la activación plaquetaria y la liberación de vesículas extracelulares más eficientemente que el citrato solo 1, 2

Anticoagulantes a Evitar

• EDTA no se recomienda para la preparación de plaquetas porque causa hinchazón y activación plaquetaria, además de alterar la integridad de las glicoproteínas 1
• Heparina no es adecuada porque activa las plaquetas 1
• El citrato de sodio simple permite que las plaquetas se activen y reduce el rendimiento plaquetario 1

Método de Preparación por Centrifugación

Técnica Estándar

• Una preparación relativamente pura de plasma rico en plaquetas (PRP) se obtiene fácilmente en un solo paso mediante centrifugación de sangre anticoagulada a baja fuerza (170-200 g) durante 10 minutos a temperatura ambiente 1
• Las diferencias en la fuerza g y el tiempo de centrifugación resultan en diferencias significativas en el rendimiento, concentración, pureza, viabilidad y estado de activación de las plaquetas aisladas 1

Métodos Clínicos Disponibles

Existen tres métodos principales que pueden proporcionar rápidamente un producto de PRP estéril 1:

1. Técnicas de centrifugación gravitacional 1
2. Separadores celulares estándar que operan con tecnología de centrifugación de flujo continuo 1
3. Tecnología de filtración selectiva autóloga (plaquetaféresis) 1

Consideraciones Críticas del Citrato

Mecanismo de Acción

• El citrato funciona como anticoagulante quelando el calcio ionizado en la sangre, previniendo así los pasos dependientes de calcio en la cascada de coagulación 3
• El calcio es esencial para la activación de múltiples factores de coagulación (II, VII, IX, X) y para la polimerización de fibrina 3

Efectos Adversos del Citrato

• El citrato de sodio contribuye a la lesión por almacenamiento de plaquetas causando aumento en la utilización de glucosa, formación de lactato, expresión de P-selectina, exposición de fosfatidilserina y formación de especies reactivas de oxígeno de manera dosis-dependiente 4
• La exposición de plaquetas al citrato aumenta la unión de fibrinógeno y puede alterar las interacciones plaqueta-fibrinógeno sin unirse directamente a las plaquetas 5
• Concentraciones de citrato presentes en soluciones aditivas de plaquetas (10 mM) pueden causar apoptosis 4

Toxicidad por Citrato

• La carga excesiva de citrato durante transfusiones masivas puede causar hipocalcemia en el receptor debido a la quelación del calcio del paciente 3, 6
• La hipocalcemia por toxicidad de citrato es más pronunciada en pacientes con disfunción hepática, hipotermia o hipoperfusión debido al metabolismo alterado del citrato 3, 6
• Se deben monitorear los niveles de calcio ionizado durante transfusiones masivas para prevenir complicaciones de hipocalcemia, que incluyen coagulopatía, disritmias cardíacas y disfunción cardiovascular 3, 6

Manejo de Muestras

Tiempo de Procesamiento

• El tiempo entre la recolección de sangre y el primer paso de centrifugación debe minimizarse o al menos mantenerse constante entre muestras para limitar efectos en la concentración y actividad funcional de las plaquetas 1
• Las plaquetas cosechadas de muestras de sangre anticoagulada que permanecen sin procesar durante 1 hora versus 24 horas pierden varias proteínas de gránulos con el tiempo a través de secreción 1

Condiciones de Almacenamiento

• Mantener los tubos de recolección de sangre en posición vertical durante el transporte 1
• Recolectar sangre en tubos de plástico a temperatura ambiente 1
• Llenar adecuadamente los tubos para obtener la proporción correcta de sangre a anticoagulante y mezclar suavemente 1

Activación de Plaquetas

• Las plaquetas deben activarse para que liberen el contenido de sus gránulos α, con el coágulo proporcionando un andamio para capturar las proteínas secretadas 1
• Los métodos de activación incluyen trombina, recalcificación, y la duración de la activación debe considerarse 1
• Se recomienda una concentración mínima de 1 mM de calcio para generar una respuesta procoagulante apropiada 1

Advertencias Importantes

• No se deben realizar mediciones de plaquetas en muestras hemolizadas, o si se incluyen, los resultados deben interpretarse con precaución 1
• Desechar los primeros 2-3 mL de sangre recolectada para evitar contaminación 1
• Usar agujas de calibre grande (21-gauge) y evitar el uso prolongado de torniquete 1
• El mismo anticoagulante debe usarse consistentemente para preparar todas las muestras en un estudio específico 1